Abstract
本實驗，使用2-Hydroxy-5-nitrobenzy1 bromide(HNB-Br) 對由N. naja atra, N.n-igricollis, H. haemachatus三種蛇毒所純化出的磷酯 Ａ２及Notexin 與 -Bunga-rotoxin 三種腱前神經毒進行色胺酸的化學修飾。當色胺酸修飾時，其磷酯 活性及毒性均顯著下降，但抗原性則不受影響。以Acrylamide quenching法，測定各蛋白中色胺酸的暴露程度結果顯示，除了H. haemachatus磷酯 因雙聚物構造的特性對HNB-Br的反應性，則與其色胺酸暴露程度相關。目前已知Ｃａ︿２＋能誘使磷酯 及腱前神經毒產生差異光譜。當色胺酸被修飾後，其光譜大致與未修飾前的蛋白相似，但在波長４５ｎｍ的區域，則顯現一新的差異光譜，此係蛋白與HNB-Br反應後，嵌入p-nitrophenol 基團所致。Scatchard plot顯示蛇毒磷酯 及腱前神經毒僅有一Ｃａ︿２＋結合部位，而色胺酸修飾後，與Ｃａ︿２＋的結合能力並未受影響。蛇毒磷酯 及腱前神經毒對ＡＮＳ消散強度有增強作用，又隨著Ｃａ︿２＋的加入，引透構造上的改變，而引起ＡＮＳ消散強度的增加或降低。當色胺酸被修飾時，磷酯 及腱前神經毒均失去與ＡＮＳ的結合能力，因而Ｃａ︿２＋無法引起ＡＮＳ消散強度的改變。藉選擇性色胺酸的化學修飾，我們證明色胺酸在蛇毒磷酯 及腱前神經毒蛋白構造中，鄰近於Ｃａ︿２＋結合的位置，同時與ＡＮＳ的親和力有關。又根據Purdon等及楊等先前實驗結果，顯示ＡＮＳ和受質結合於同一疏水性區域。因此，我們推論色胺酸在蛇毒磷酯 及腱前神經毒蛋白構造中，可能與受質的結合有關。