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蛇毒結晶毒蛋白之單原抗體的研究
Thesis

蛇毒結晶毒蛋白之單原抗體的研究

郭育綺
Masters, National Tsing Hua University
1985

Abstract

蛇毒結晶毒蛋白單原抗體小白鼠加強免疫脾臟細胞融合瘤技骨髓癌細胞篩選 MONOCLONAL-ANTIBODYBACB/C-MOUSEBOOSTSPLEEN-CELLSHYBRIDOMA-TECHNIQUENS-1-MYELOMA-CELLS
小白鼠(BALB/C mouse)以蛇毒結晶毒蛋白免疫,在加強免疫(Boost) 注射後三到四天,我們取出其脾臟細胞(spleen)將之磨碎而獲得脾臟細胞(spleen cells),然後以融合瘤技術(Hybridoma technique )將它與老鼠骨髓癌細胞(NS-1 myelomacells )融合。長成的細胞經過篩選及純株培養(cloning ),我們得到了兩個穩定的融合瘤細胞株(各為1D1及2D2 cell lines ),它們能夠產生針對蛇毒結晶毒蛋白的單原抗體(monoclonal antibody )。為了要得到大量的單原抗體,我們以兩種方法來取得:1.將細胞大量培養,取其上清培養液(culture supernatant ),然後通過親和性管柱(affinity column )將單原抗體純化出來。2.將融合瘤細胞注射入小白鼠腹腔內,使其產生腹水癌(Ascites tumor ),然後可收集腹水通過親和性管柱,而獲得單原抗體。用上面兩種方法,我們得到的單原抗體量為:從三毫升複水獲得○•四三毫克的單原抗體,而從五百毫升培養液中得到○•八至一•○毫克的單原抗體。將我們純化出來的單原抗體,用Ouchterlony test鑑定其屬於Immunoglobulin G.(Ig G1 ),分子量從電泳法(SDS-gel electrophoresis )測知約為一五、五○○○,其中重鏈(Heavy chain )分子量為五二、五○○,輕鏈分子量(Light chain molecular weight)為二五、○○○。

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