Abstract
本論文中,我們針對kinase FA/GSK-3a(一種脯氨酸引導的蛋白質磷酸化酵素) 的活性調控機轉與癌細胞增殖之間的關係進行研究.我們以不同的酪氨酸磷酸化酵素抑制劑,低劑量短時間處理人類攝護腺癌細胞PC-3, 透過抑制不同類型酪氨酸磷酸化酵素的活性,配合抗FA/GSK-3a抗體免疫沈澱法及高專一性活性分析,結果發現 genistein, apigenin, quer- cetin,kaempferol, herbimycin A 可對kinase FA/GSK-3a的活性產生不同程度的抑制. 進一步以西方雜合法及磷酸酪氨酸含量分析,發現受藥物處理的細胞中 kinase FA/GSK-3a蛋白含量並不改變, 但其磷酸酪氨酸含量隨著其活性的下降而減少,說明了genistein等藥物所抑制的酪氨酸磷酸化酵素是透過去磷酸化kinase FA/GSK-3a的磷酸酪氨酸而降低其活性.又genistein, apigenin, quercetin, kaempferol等藥物為flavonoid 一類,而 herbimycin A則可抑制非受器型酪氨酸磷酸化酵素(non-receptortype tyrosine kinase).綜上所述,我們發現kinase fA/GSK-3a 上游的酪氨酸磷酸化酵素可能屬於 non-receptor type/flavonoid-sensitivety- rosine kinase.另一方面,本論文更進一步深入研究 kinase FA/GSK-3a與癌細胞增殖過程的關係. 結果發現當 PC-3 細胞中kinase FA/GSK-3a的活性受到前述藥物抑制時,癌細胞的增殖能力也會在短時間內受到抑低, 且二者降低的比率相互吻合並與用藥劑量成正比關係.反之當PC-3細胞受 daidzein, compound 5, tyrphostin A25, lavendustin A,aminogenistein等藥物處理時,在不影響kinase FA/GSK-3a活性的狀況下,癌細胞的增殖能力在短時間內亦無顯著改變.我們更發現genistein這類藥物對kinase FA/GSK-3a的作用及抑制癌細胞的增殖能力也發生在不同細胞株,如人類攝護腺癌細胞LNCaP及表皮癌細胞A431中,表示此非特殊現象,更增加了其可靠性.因此綜上所述,種種結果顯示出,藥物可能透過抑制non-receptor type/flavonoid-sensitive tyrosine kinase(s),使癌細胞中過度表現的kinase FA/GSK-3a的酪氨酸去磷酸化去活化, 再透過訊號傳遞很快地造成癌細胞增殖速率的降低,確認了kinase FA/GSK-3a與細胞增殖間的關聯.