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豬脾臟去氧核糖核酸拓樸異構□
Thesis

豬脾臟去氧核糖核酸拓樸異構□

黃弘文
Masters, National Tsing Hua University
1987

Abstract

去氧核糖核酸拓樸異構□活性抗藥性染色帶蔗糖密度梯度離心 SUCROSEDNA
到目前為止,已有許多從各種生物來源純DNA 拓樸異構□的報告,但純化的質方面圴無重大的突破,本實驗室曾經從雞紅血球細胞核中,分離DNA 拓樸異構□Ⅰ。以及從雞的胚胎中分離DNA 拓樸異構□Ⅰ及Ⅱ。鑑於上次所純化的DNA 拓樸異構□純度及產量均不理想,為了以後的研究,須要尋找其它的材料。在選用紅虫,蝸虫,以及豬脾臟等材料,比較後,發現在1.來源的取得,及2.初步萃取液的活性看來,豬脾臟是較好的。經改良純化的方法,終於得到在Coomassieblue stain為二條染色帶。它的抗藥性和雞胚胎的DNA 拓樸異構□有明顯的不同,和calf thymus DNA 拓樸異構□相似;但金屬離子的反應濃度,和雞胚胎的相似,和c-alf thymus DNA 拓樸異構□差別較。大純化□豬脾臟DNA 拓樸異構□,我們改進了已有報告的calf thymus DNA 拓樸異構□的幾個步驟。由於blue gel 的結合常數(affinity constant )較小,經過試用了幾種染料(blue,red ,green ,yellow)後,結果以red gel 的效果較佳。幾種detergent (Triton X- 100,Brij,..)的比較,以Brij較佳。以SDS PAGE和s-ucrose gradient centifugation 來做實驗,定出豬脾臟DNA 拓樸異構□Ⅱ為blomo-dimer,其分子量為172KD。

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