Abstract
本論文主要著眼於豬脾臟 topoisomerase II 及 MAR之研究, 分三部分討論。第一部分為topoisomerase II 之研究, 第二部分則為topoisomerase II 及 MAR關係, 第三部分是 MAR 特性研究。關於topoisomerase II 方面, 本論文主要集中在藥物的 screening及topoisomerase II cutting site的研究。 除早期發現withangulatin A 抑制 topoisomerase II 活性, 近年來更發現NPCLHAC7, 8可以導致 in vivo DNA breakage ( 但在 in vitro 對topoisomerase II relaxation抑制卻不強 ) 。其真正的機制尚待進一步探討。 此外, 在 topoisomerase II cutting site 的研究, 我們發現其切的位置主要為區域性能量高的地方, 且對於結合股 DNA 有高度的選擇形成 3'-A 。以 topoisomerase II 保護的 genomic DNA 的片段中,我們發現高比率的特定 DNA fragment(Q1), 此外, 我們亦於 spleenMAR DNA 中發現高比率的 Q1,顯示 topoisomerase II 與 matrix 緊密的關係。 對 Q1 的研究發現它有以下特性: 1. 它不僅在 spleen 中發現, 在其它器官及其他 species 中亦存在, 且其 resctriction map不同; 2. 其在殖入質體後,會導致由 E. coli 分離出之質體有大量的knotted form 出現, 由 deletion 實驗中發現, Q1 的 topoisomeraseII cutting site 扮演重要的角色; 3. 在polyacrylamide gel 中, Q1 跑的速度較等長的 DNA快。第三部分對MAR 的特性分析, 以 single strand的形成為指標, 發現只有約30% MAR 可以被 S1 nuclease 切, 但亦發現某些片段 MAR 殖入方向的改變會反映在質體二次構造上, 而導致 S1 nuclease 攻擊 pattern不同, 另外, 我們以 direct repeats 數目分析 MAR, structure gene及 genomic DNA, 發現不同的 pattern 。 並顯示了 MAR 中的 directrepeats數目的確較 genomic DNA 多。