Abstract
從豬腦中之Synaptic junction (SJ)中，利用detergent Triton X-114溶解出麩胺酸結合蛋白，此蛋白與L-[ H]glutamate 的結合是可逆的，其K 與B 分別為1.48+/-0.18μM與178.2+/-15.9 pmole/mg ，且其結合的量隨蛋白質濃度增加而增高。結合至此蛋白之L-[ H]glutamate ，均可被麩胺酸接受器之non-N-methyl-D-Aspartate(NMDA) agonist有效地取代。但NMDA與a-amino-4-phosphono-butyrate均沒有作用，這些competieive ligands 取代L-[ H]glutamate 之能力高低為quisqualate＞a-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid (AMPA) ＞L-glutamate＞kainate。經Triton X-114溶解出的麩胺酸結合蛋白，經過DEAE-anion exchange chromatography與Wheat germ agglutinin Sepharose 4B chromatography 純化之後，其specificL- [ H]glutamate binding activity較synaptic junction 約提高49.3倍，而且經純化之麩胺酸結合蛋白經gel-filtration決定其molecular mass約620+/-50 KDa。經過DEAE-chromatography 純化之蛋白質，其pharmacological profile 仍與Triton X-114溶解後所得蛋白相同。Triton X-114所溶解的麩胺酸結合蛋白，經Trition X-114 的phase separation後，麩胺酸結合活性大多位於下層(deter-gent phase)，而且因為可以與WGA 結合，因此推斷為integral membrane glycoprotein。我們亦嘗試用各種不同的lectin chromatography ，或合成一系列glutamate, quisqualate和kainate 等affinity columns，最後亦利用isoelectric focusing等方法欲做進一步的純化，其結果也將包含於本論文中。