Abstract
從豬腦中分離得到的 synaptic juntion (SJ)中，用 1 ％ Triton X-114 及 0.15M KCl 可溶得 AMPA/kainate 次類型麩胺 酸受器， 依序經過 DEAE-anion exchange chromatography ， wheat germ agglutinin Sepharose 4B chromatography ， sucrose density gradient centrifugation 步驟純化後，可得到純度 90％以上之麩胺酸受器蛋白， 純化步驟中經過 DEAE-anion exchange chromatography 以梯度濃度 NaCl 沖出時， 可得到三個具麩 胺酸結合活性的 peaks ，而其分別經純化得到的麩胺酸受器蛋白即分稱 為 peak 1 ， peak 2 ， peak 3 。經 SDS-PAGE 分析得知此三個 peak 純化蛋白之組成分子量均在 106 KDa 左右， 並均可被 anti- rat GluR1 antibody及 anti-rat GluR2 ＆ 3 antibody 所辨識， 且 為 glycoprotein 。 而以 2 緯電泳 (Two-dimension gel electrophoresis) 分析 peak 2 及 peak 3 蛋白組成，可見均是由一連 串分子量相近 (106 KDa 左右 ) 之多胜□鏈所組成， 其 pI 值在 pH 5.53 ∼ 6.9 之間，並且這一連串多胜 鏈均同時可被 anti-rat GluR1 及 anti-rat GluR2 ＆ 3 antibody 所辨識。 故推論 在豬腦中 AMPA/kainate 次類型麩胺酸受器蛋□ 晙 O 以類似 rat GluR1 及 GluR2 ＆ 3 subunits ， 經過一些 post- translation modification 造成的多種 isoforms所組成。 故以 N- glycosidase F 及 alkaline phosphatase分別進行 deglycosylation 及 dephosphorylation 後再以 2 緯電泳分析，初步結果顯示 AMPA/ kainate 次類型麩胺酸受器至少具有 glycosylation及 phosphorylation 此二者 post-translation modification 。另外由 Con A column 的實驗結果中亦顯示豬腦中 AMPA/kainate 次類型麩胺酸 受器組成之 subunits 具有不同的 glycosylation ， 產生具不同醣基組 成的 subunits， 此外我們嘗試產生受器蛋白及其相關蛋白 (associated proteins)之單株抗體，其結果也將包含在本論文中。