Abstract
白豬腦純化之Synaptic junction (SJ)，試以十種不同的非離子性detergent溶解 L-〔 H〕glutamate binding sites。結果顯示，2%的Triton X-114 在50 mM Tris/ac-ette.0.1 mM EGTA pH 7.4 的條件下, 所溶出的L-〔 H〕glutamate 結合活性(bind-ing activity) 最高(119 fmol)。L-〔H〕glutamate對Triton X-114溶出的蛋白質具有可逆性的結合, 并且隨蛋白質濃度增加而增高。由Scatchard plot分析的結果顯示具有單一的結合位置(single binding site),其K 及Bmax值別為1.67uM及38.9 pmol/mg。同時此部分蛋白質可被glutamate receptor的agonist N-methyl-D-aspartate (NMDA), kainate及quisqualate 所取代, 其IC 值分別為3.42, 4.84及0.39 uM。經Triton X-114溶解的樣品於0 時為均質分布(homogenous), 當加熱超過20 (Tr-ton X-114 的cloudy point) 時經離心后可分為上層(aqueous phase) 及下層(dete-rgent phase)。同時約68.3% 的結合活性位於下層，且其specific 〔 H〕glutamatebinding activity 為phase-separation前的2.86倍。此部份蛋白質再經DEAE-Seph-arose CL-6B column結合部分可由含0.5 M NaCl溶液洗出,其specific binding act-ivity 為Triton X-114溶出樣品的4.2 倍。Quisqualate 對此部分binding sites 的親和力很強(IC =0.16uM. Imax=100%)且AMPA ( -Amino-3-hydroxy-5-methyl-4-is-oxazole-4-propionic acid,glutmate receptor的agonist)與quisqualate 的compe-tition curve互相平行, 而IC =3.39 uM, 且Imax=96.6%, 而NMDA及APB 在10 =uM的濃度下對L-〔 H〕glutamate 沒有如此明顯的抑制效果。綜合上述結果，我們自synaptic junction,以Triton X-114溶出了一部份glutamatebinding sites, 這些binding sites具有下列三項特性:(1)極可能是intrinsic mem-brane 蛋白質; (2) 位於synapses上; 及(3) 具有與Quisqualate 及AMPA選擇性的親合力。基於這些特性，我們推論這些溶解出的glutamate binding sites 應該就是在腦中神經末梢負責音訊傳遞 胺酸接受器的Quisqualate/AMPA次型(subtype)。