Abstract
後突觸質密區(postsynaptic density,簡稱 PSD)是位於後突觸膜 (postsynaptic membrane)下方由蛋白質組成的緊密結構, 根據其蛋白質 組成及其所在位置,推測PSD在神經傳導(neurotransmission)及神經可塑 性(synaptic plasticity)上扮演重要的角色.PSD由超過30種以上的蛋白 質所構成,這些蛋白質間如何彼此辨識, 如何結合成一個緊密的超結構( ultrastructure)成為極為重要但卻不易去解決的問題.雙硫鍵鍵結為蛋白 質分子間最常出現的共價鍵鍵結,本論文將維持 PSD中原有的雙硫鍵,並利 用 S-carboxymethylation修飾其餘free -SH group,再行sucrose density gradient ultracentrifugation(蔗糖濃度梯度離心),結果成功 地由PSD中純化到一個完全由雙硫鍵彼此鍵結的蛋白質複合物(disulfide- bond cross-linked protein complex,簡稱 DCP complex).根據一維和二 維電泳(1D- and 2D- PAGE)及抗体點漬法 (Western blotting)的鑑定,這 群蛋白質包括 actin, tubulin, Ca2+/ Calmodulin dependent protein kinase II及AMPA/KA subtype glut- amate receptor在內的雙硫鍵鍵結 蛋白質複合物,經負染色後, 在穿透式電子顯微鏡下觀測為16-26 nm直徑 大小的 particle, 此與以往電顯觀測PSD中的組成顆粒物質大小相若. 因 此我們不僅提供一個較以往分析PSD為佳的系統--sucrose density gradient ultracentrifugation也成功地利用系統簡化PSD至單純的雙硫 鍵鍵蛋白質複合物, 並能夠對此複合物分別用生化及電顯的方法來加以分 析.