Abstract
後突觸質區 (postsynaptic density, 簡稱 PSD) 是位於後突觸膜(postsynaptic membrane) 下方由蛋白質組成的緊密結構，根據其蛋白質組成及其所在位置， 推測 PSD 在神經傳導(neurotransmission) 及神經可塑性(synaptic plasticity) 上扮演重要的角色。 PSD 由 25~30 種的蛋白質所構成， 這些蛋白質間如何彼此辨識， 如何結合成一個緊密的超結構 ( ultrastruc-ture) 成為極為重要但卻不易去解決的問題。 由雙硫鍵鍵結為蛋白質分子鍵結，所以本論文利用 dithioerythritol 將PSD 中之蛋白質分子間雙硫鍵還原成free -SH group， 再用 iodoacetic acid修飾 free -SH group，造成含有 cysteinee 蛋白質在 SDS-PAGE 移動變慢，以及根據 DIG 染色、 碳十四標記半胱胺酸 (cysteine) 和 Western blot 的鑑定， 發現 PSD 中含有較多半胱胺酸的主要蛋白質有 actin、 CaM kinase II 和tubulin，而處理過 DTE 和 IAA 的 PSD 中，則會出現另一個含有高量半胱胺酸而以雙硫鍵鍵結分子量為 62KDa 的新的主要蛋白質。 而我們也發現完全由雙硫鍵鍵結在一起的 DCP complex (Disulfide-bond Cross-linked Proteincomplex) 其雙硫鍵的形成乃是純化 PSD 的過程所造成的。 若是在純化 PSD 的過程中加入防止雙硫鍵形成之化合物－iodoacetamide、EDTA 及 EGTA，則便沒有 DCP complex 的產生。在我們所純化的 cysteine-rich protein complex(CRP complex) 中，55,62 KDa 的蛋白是主要之組成蛋白，由 DIG 染色結果得知這兩種蛋白含有高量的半胱胺酸， 估計所含有的 cysteine 含量為 62 KDa 約12.5%， 55 KDa 則約16.8%。由 Western blot 的結果得知 CRP complex含有 tubulin，CaM kinaseII 及 actin 則可能因存在的量太少，故無法偵測到。 而將 CRP complex 所有的雙硫鍵還原再進行carboxymethylation 後， 則會出現另一個 66~68 KDa 的蛋白。