Abstract
致癌性的甲基化合物 N-methyl-N'-nitro-N- nitrosoguanidine (MNNG)會造成多種核酸鍵結物，其中 O6-甲基鳥糞嘌呤 (O6-meG) 會造成 G->A突變核酸共價鍵結物。O6-meG 主要是由 O6-烷基鳥糞嘌呤甲基轉移酵素(O6-alkylguanine methyltransferase; AGT) 修補。MNNG 對 AGT 活性高的中國倉鼠卵巢細胞 (AGT 細胞) 比不具 AGT 活性的同源細胞(CHOM細胞) 誘發出突變頻率尤其是 G.C->A.T 突變顯著地低，並且所有 G.C->A.T 突變中的 guanine 均位於非轉錄股上，暗示著 AGT之修補途徑可能與基因轉錄偶合，使得轉錄股上的 O6-meG 優先被修補 (Cancer Res.,54, 3857, 1994)。為了瞭解這個理論，在本論文中利用 RNApolymerase II 的抑制劑，a-amanitin 處理 AGT 細胞來觀察基因在轉錄抑制下，MNNG 誘發的突變特異性。首先以 nuclear runoff 方法，證實1mg/ml a-amanitin 處理 AGT 細胞 16 小時，完全抑制了細胞 hprt 及agt 基因的轉錄。a-Amanitin 會使 AGT 細胞群落形成能力降低，然而不會使突變頻率增加。此外，a-amanitin 使細胞生長變慢。在基因轉錄抑制之下，使得 MNNG 誘導的突變頻率顯著地降低; 例如 a-amanitin(1mg/ml) 將 10mM MNNG 誘發的突變率由 30.4/106 降至 17.4/106。此結果暗示著表現不活躍的基因，較不會發生突變。以 RT-PCR 及直接DNA 定序方法，分析在基因轉錄抑制下，MNNG 誘發之 6-TG 抗株的hprt 基因突變形式。在分析到的 25個鹼基取代中，只有 2 個是 G.C->A.T，比在不受基因轉錄抑制下 MNNG 誘發出之比例 (8/20) 明顯地少。由此結果推測 a-amanitin之處理，細胞並沒有失去 AGT 活性。此外，在基因轉錄抑制下， MNNG 誘發的 T.A->C.G 以及 T.A 顛換突變中的thymine 位於轉錄股的比例，比那些在轉錄進行下所得到的高。此結果推測細胞的修補烷基鍵結物途徑，可能與基因轉錄過程偶合。