Abstract
睪丸是一個對鎘的毒害非常敏感的器官。小劑量的鎘很容易就造成睪丸中組織的出血壞死，然而同一劑量對於其他器官卻無明顯的影響。在動物體內存在一類含高比例cysteine，低分子量，可受金屬離子誘導的蛋白質，名為金屬硫蛋白(MT)，一般認為它能與鎘結合而有降低其毒性的功能。雖然在睪丸中被發現存有高含量的 MTmRNA，然而這些MT mRNA 的量並無法因金屬誘導而再增加。在此令人懷疑MT是否存在於睪丸中。有些報告嘗試在睪丸中純化MT，在純化過程中，不但沒得到MT，反而純化出另一種胺基酸組成與MT截然不同，但可與鎘結合的蛋白質。另一方面，以immunohistochemistry的方法研究又顯示MT可能存在於睪丸中。由於以上相互矛盾的證據，使我們想要瞭解睪丸中的細胞是否能夠表現且被誘導產生MT。為了研究此一問題，我們利用睪丸組織間隙萊迪氏細胞株做實驗材料，將其培養在含鎘的培養基中十二小時後，經硝化處理，以石墨式原子吸收光譜儀偵測細胞中鎘的含量，結果顯示鎘能進入萊迪氏細胞中，而且隨著鎘劑量的增加，細胞中累積鎘的含量也增加。接著以鎘、鋅、銅或dexamethasone 為誘導原來刺激細胞，並抽其RNA ，以北方吸漬法分析其MT基因衰現的情形，很顯然的，萊迪氏細胞中的MT mRNA 可被這些誘導原所誘導。為了証明被誘導出的mRNA是屬於MT家族，我們採用了對isoform 有專一性的探針來分析RNA 。結果顯示細胞中的二種MT mRNA 都能被轉錄出來。我們更進一步的以primer extension的方法來偵測MT是否轉錄於正確的基因位置，結果證明在萊迪氏細胞中的MT mRNA 是從正確的轉錄起始位置開始進行。在轉譯層面上，我們將細胞培養於缺乏半胱胺酸之培養基中，並加入35Ｓ標記之半胱胺酸來標記新合成之蛋白質，再將細胞粗萃取液經過SDS-PAGE分析後，結果可見到MT的確能夠在睪丸中的萊迪氏細胞表現。綜合上述各項結果，我們認為MT是可以在睪丸間隙細胞中合成的，而鎘對睪丸的傷害，至少對萊迪氏細胞而言，不應歸咎於MT的無法表現。