Abstract
本研究是對雞肝葡萄糖運送子的鑑定. 首先, 我們利用 D型葡萄糖可以抑制細胞鬆弛素 B型 (cytochalasin B ) 和葡萄糖運送子之結合的特性.研究雞肝葡萄糖運送子的性質. 其次, 利用分子生物技術和聚合酵素鏈結反應 ( polymerase chain reaction)得到完整的雞肝葡萄糖運送子cDNA ( 命名為 Ch-GT2 ) . 最後, 利用細菌和蛙卵表現系統確定 Ch-GT2 是一葡萄糖運送子 cDNA.在 D型葡萄糖抑制細胞鬆弛素 B型和葡萄糖運送子之結合的實驗, 得知, 雞肝細胞膜的葡萄糖運送子的特性是 (1)對於運送的葡萄糖有立體選擇性; (2) 雞肝葡萄糖運送子和葡萄糖的親和常數 (Km) 是 60 mM, 和細胞鬆弛素 B型的抑制常數 (Ki) 是 0.12 uM.利用分子技術 (molecular cloning)和聚合酵素鏈結反應得到完整的雞肝葡萄糖運送子cDNA, 其特性是 (1) cDNA總長度是 3.4 kilobase, 包括一長66個 base 的 5端不轉譯區, 一長約 1.8 kb 的 3 端不轉譯區, 及一長 1566 base 的轉譯區, 此區可轉譯成長度為 533 個胺基酸, 分子量約 57k ; (2)疏水性程度圖(hydropathy plot ) 分析這蛋白質, 含有12個推測的穿透細胞膜區, N 端和 C 端位在細胞內側, 第一和第二個穿透細胞膜區之間的細胞外親水性區是較其他型葡萄糖運送子大二倍左右, 並且含有二個可能被糖化之胺基酸. Ch-GT2 基因, 在細菌表現系統下, 其運送葡萄糖的活性增加六倍, Ch-GT2的突變基因(Ch-GT2A)(在 N端少七個胺基酸) 在細菌表現系統下, 其運送葡萄糖的活性, 和 Ch-GT2(正常型) 相當. 另外, Ch-GT2A 在蛙卵表現系統下, 有50倍增加. 因此, 這些實驗顯示 Ch-GT2 確定是雞肝葡萄糖運送子的基因. 北方雜和實驗顯示雞肝葡萄糖運送子具有組織特異性. 南方雜和實驗顯示雞肝葡萄糖運送子是單一基因.