Abstract
本研究從牛骨中萃取, 並成功地以免疫─親和性層板分離具有生理活性的骨質成型蛋白(bone morphogenetic protein, 簡稱 BMP)。此蛋白可促進間葉細胞分化為骨母細胞, 也可促使骨細胞增殖, 並與氫氧磷灰石混合就可做為骨骼移植材料; 並減少手術時間和併發症, 在臨床醫療上極具潛力。初步從牛骨中以6 M urea及0.5 M CaCl 的混合液將具有活性的 BMP萃取出, 再利用不同的透析步驟去除不具活性蛋白質, 提高其活性。再進一步進行兩次Hydroxyapatite管柱吸附, 利用磷酸鹽濃度梯度洗出具活性物, 於SDS - 聚丙烯醯胺凝膠電永上鑑定其純度。並以此活性蛋白質以免疫學方法注入兔子衩施免疫。將經三次免疫兔子的血清取出, 並以酵素免疫分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay, 簡稱ELISA)測定, 顯示其含有的抗 BMP之抗體, 血清以硫酸銨沉澱及 Sephadex G-25, Pseudo immuno-affinity Protein-A管柱來純化抗體, 並法試將此抗體連接於CNBR-activated Sepharose CL-4B膠體做成免疫親和性層析管柱(immuno-affinity chromatography column) 。將含有 BMP的牛骨凝膠粗萃取液通過Hydroxyapatite管柱經透析後, 溶於0.1 M phosphate buffer╱0.5 M NaCL pH 7.0 注入免疫- 親和性層析管柱, 再使用 0.1M glycine buffer pH 2.8 成功地分離出具誘發骨母細胞增殖的生理活性之蛋白質, 其分子量約為75 kd, 經2-mercaptoethanol 還原雙硫鍵後解離出分子量約17kd之蛋白質。