Abstract
本論文分為兩大部分。第一部份是有關於中樞神經系統中麩胺酸受器 AMPA/kainate receptor， 其次級體間雙硫鍵構造的研究。 本實驗室過 去曾經在由豬腦及鼠腦純化出的 synaptosomal plasma membrane 上觀察 到 AMPA receptor次級體之間會形成雙硫鍵構造。 為了確定真有這個現 象存在而非僅是因純化過程中蛋白質被氧化所致， 我們選擇了兩種比較 接近 in vivo 狀態的系統，即培養的大腦皮層細胞及海馬迴切片，將之 快速溶在含有 SDS 的電泳用樣品溶液中，利用含 3.5% acrylamide 的膠 體進行 SDS-PAGE 及 Western blot， 對兩種材料中 AMPA receptor subunits之間的雙硫鍵進行分析。 隨著培養的大腦皮層細胞逐漸成熟， AMPA receptor 次級體之間的雙硫鍵逐漸增加，即在系統中觀察到 receptor 被雙硫鍵連接起來所形成的 dimer 逐漸增加， 到了 14 天 左右達到 plateau。 Dimer在全部 AMPA receptor 次級體中約佔 1.5%。 為了暸解雙硫鍵形成的過程是否與神經細胞的活性有關， 我們分 別對培養的大腦皮層細胞及海馬迴切片進行藥物及電刺激， 發現經由活 性的改變的確會使次級體之間的雙硫鍵增加至 2倍左右。 在海馬迴切片 的部分中，溫度的上升似乎也是一個造成雙硫鍵生成的因素。 為了找出 雙硫鍵形成的機制，我們曾試用抑制神經活性的抑制劑對海馬迴切片做處 理；為了了解雙硫鍵的形成是否與氧化還原狀態有關， 我們對海馬迴切 片進行消除 Glutathione 的處理， 即處理 Diethyl Maleate(DEM) ， 但結果都不是很明顯，仍然不能夠說明雙硫鍵形成所經由的途徑。 本 論文的第二部份主要是希望能找到一個新的工具， 用來觀察神經細胞死 亡過程中細胞骨架的變化過程。 我們嘗試將標有螢光物質的 tubulin 運用電穿孔法 (electro- poration) 打入一群細胞中，使細胞 中原有的 micro- tubule 顯現螢光，再利用螢光顯微鏡， 觀察不同狀況 及時間下細胞骨架變化的情形。 這部份的工作只進行了初步的研究，我 們在此報導此初步的成果。