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麩胺酸接受器之純化研究
Thesis

麩胺酸接受器之純化研究

冷治湘
Masters, National Tsing Hua University
1989

Abstract

麩胺酸純化研究結合活性[ H]麩胺酸 BINDING-SITEPEAKPATTERN
我們用0.5% Triton X-100 及0.5% digitonin的mixture 從豬腦中溶解出麩胺酸bin-ding site ,當通過Sepharose 6B柱層分析後,用[ H]Kainate 可測得一個有活性的peak,用[ H]麩胺酸可得到兩個peak。我們依序定為 peak I,peak II,peak III。在這個階段10μM 的2-amino-4-phosphonobutyrate(APB)可抑制10%[ H] 麩胺酸結合活性。這三個peak的分子量分別是680Kd,250Kd,70Kd。它們的stokes半徑為83 ,6032 。經過DEAE-sepharose CL-6B柱層分析後,peak II 與[ H]麩胺酸的結合活性為Kb=0.32μm,Bmax=193 pmol/mg protein,而peak III的結合活 B性為 Kd=0.1μm,Bmax=900 pmol/mg protein。這兩部份的sample在SDS-PAGE上用Coomassie blue染出主要蛋白質的band是:peak II 有 59.5,50,43,37.2,31 Kd。peak III有56.7,47,28.2,25Kd。peak III的[ H]麩胺酸的結合活性較peak II 高;peak II 在25℃下的活性比 4℃要高,但peak III則相反;到達平衡的時間,peak II 需2-3 小時而peak III則需 3小時以上;再加上在SDS-PAGE的結果發現peak II 與peak III蛋白質的pettern 並不相同,由以上的差異性,我們認為peak II 及peak III是兩種不同與[ H]麩胺酸結合的蛋白質。

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