Abstract
【摘要】 黃嘌呤氧化酶，分子量約為290kDa，是一個均相二聚體( homodimer )。之前的研究都認為黃嘌呤氧化酶兩個單體的催化能力是各自獨立不受彼此影響的。實驗中，我們利用異位黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶複合物來研究此酵素的交互作用，此複合物的解離速度很緩慢(可由3-1(2)實驗結果得知)，運用這個特點，幫助我們可以製造出只有一邊單體被異位黃嘌呤佔住的黃嘌呤氧化酶，或是兩邊都被佔住的情況，方便研究的進行。我們發現異位黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶複合物解離的速度會受到相鄰單體是否也與異位黃嘌呤結合的影響，當黃嘌呤氧化酶兩個活性中心都與異位黃嘌呤形成錯和物時，會加速相鄰單體異位黃嘌呤的解離。此外，當黃嘌呤氧化酶其中一個單體與異位黃嘌呤結合形成複合物後，相鄰單體的催化能力也會改變，我們所測試的受質中，其催化速率皆受影響而變慢。最後，我們利用螢光與旋光光譜證明黃嘌呤氧化酶與異位黃嘌呤形成複合物時，酵素構型發生了改變，黃嘌呤氧化酶之輔酶FAD的螢光發生藍位移，螢光強度減弱。旋光光譜在三級結構變化的波長範圍內，黃嘌呤氧化酶與異位黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶複合物也有明顯差異。我們認為，異位黃嘌呤與黃嘌呤氧化酶結合後，構型上的改變是造成交互作用的重要因素之一。