Abstract
本研究的主要目的在探討黃連素單獨使用或合併氬離子雷射對於９Ｌ大白 鼠神經膠質瘤細胞在體外的作用。 然後觀察它們對於細胞的毒殺性以及 對於ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白質之生物合成速率的影響， 並且觀察９Ｌ細 胞在細胞形態上的變化，以探討其可能之機轉。 本實驗首先將適量的細 胞接種在細胞培養基內，經過培養１８小時。 然後用不同濃度的黃連素 單獨處理完後， 分別用集落分析法（ Colony formation assay ）以及 微量滴定法（ Microtitration assay ）即【ＭＴＴ】測定其細胞 存活率（ Survival fraction ），由此計算黃連素對９Ｌ細胞的半致死 濃度。 又用不同劑量的氬離子雷射配合黃連素將細胞處理完後， 以微量 滴定法測定其細胞存活率，以探討雷射對黃連素細胞毒殺性的影響。 另外，對於經過同樣處理後的９Ｌ細胞， 加入含有 3H-thymidine ， 3H-uridine 及 3H-leucine 的培養基，再予培養１８小時後，用放 射性同位素追蹤法測定ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白質的生物合成速率， 以探 討黃連素對９Ｌ細胞在生物合成速率方面的影響，以及合併雷射處理後的 效應。 同時，另從細胞形態變化的角度來探究黃連素及雷射處理對９Ｌ 細胞的作用， 將處理後的細胞取下離心後， 經中性福馬林固定作Ｈ＆Ｅ 染色，觀察細胞形態的變化。 實驗結果顯示：不論用集落分析法或 是微量滴定法來測定，黃連素對９Ｌ細胞的半致死劑量【ＬＣ 50 】都是 約為５５μｇ╱ｍｌ。 在合併低能量雷射處理後， 黃連素對９Ｌ細胞的 毒殺性濃度明顯地降低，其降低的程度與雷射光束的能量大小有正相關性 ， 其半致死濃度可以降低至１５μｇ╱ｍｌ以下。 黃連素對於９Ｌ細胞 在生合成速率方面，有明顯的抑制作用，其抑制性與濃度之間也有類似的 相關性。 同時氬離子雷射也會增強這種抑制效應，不過與雷射的能量大 小並沒有明顯的相關。 另外，經過黃連素處理的９Ｌ細胞， 觀察到細胞 形態上的變化包括細胞崩解（ cytolysis）、空泡形成（ vacuolization ）、以及退化性變化（ degeneration ）；同樣地，雷射 處理也會增強這些細胞毒殺效應。 本研究證實：黃連素對９Ｌ細胞的毒 殺效應， 以及雷射處理對它的增強效果，顯示對９Ｌ細胞而言，黃連素 是一種有效且對光敏感的細胞毒殺性藥劑。 The cell-killing effects and its possible mechanism of berberine used alone or in combination with argon ion laser against 9L rat glioma cells were studied. The survival fraction of 9L cells after single treatment of berberine has been investigated by both colony formation and microtitration (MTT) methods, the half lethal concentration (LC50) of berberine has been estimated to be 55 μg/ml. After the addition of low energy laser treatment, the LC50 of berberine markedly decreased to 15μg/ml. The effect of berberine on biosynthesis for DNA, RNA and protein of 9L cell was enhanced by argon ion laser. Moreover, when morphologic change was examined, the 9L cells showed cytolysis, vacuolization and degeneration after berberine treatment; the laser treatment enhanced the cell- killing effect. The study proves the cell-killing effect of berberine combined with laser treatment on 9L rat glioma cell line, hence introducing the possibility of berberine as a photosensitive agent.