Abstract
介白素-12 (interleukin-12) 能誘導T細胞和NK細胞產生干擾素-γ，干擾素-γ (interferon-γ)則具抑制腫瘤生長與調節免疫的重要功能，二者均能調控細胞性免疫作用。在數種干擾素中，干擾素-γ之免疫調節能力優於其他干擾素，為目前重要的醫療用蛋白質藥物。通常量產農工業及或藥用等級重組蛋白質產品時，純化回收的程序繁複且成本甚高，因此發展高效能、低單價的蛋白質產品的製程為全球生技產業的關鍵實務需求。本篇研究的目標為發展高效率介白素-12及干擾素-γ的重組蛋白質生產、純化、及應用，本研究利用嗜甲醇酵母菌(Pichia pastoris)成功表現胺基端含米根黴菌葡萄糖水解酵素之澱粉吸附區域(Rhizopus oryzae starch-binding domain, RoSBD)及其酵素功能區連結片段(Rhizopus oryzae glucoamylase linker)之人類介白素-12 (AL*IL12)和干擾素-γ (AL*I)。重組蛋白質AL*IL12和AL*I的表現產量分別約為10 mg/L和30 mg/L，二者之澱粉吸附區域使其能利用澱粉吸附的方式快速純化。分析重組蛋白質AL*IL12和AL*I顯示二者之分子量、醣基化程度、及聚合體比例等生化特性、及IL-12和IFN-γ誘導下游基因表現的生物活性。本論文研究之具體貢獻為開發重組IL-12和IFN-γ蛋白質成為生技製藥領域中分子檢測及疾病治療應用之潛力標的。